Kako uporabljati gensko pištolo

1. Materialna priprava

Na posodo za kulturo velikosti 9 cm2 smo dali tanek sloj medija, material (običajno nezreli zarodki, zreli zarodki, mali kalus, celice suspenzije, protoplasti itd.) Smo nanesli na sredino posode s premerom 3 cm. .

2, obdelava zlata v prahu

V epruveto za centrifugiranje vzemite 60 mg prahu zlata ali prah volframa, dodajte 1 ml absolutnega etanola, dobro pretresite 3 minute, centrifugirajte za 1rain pri 9615g, odstranite supernatant, dodajte 1 ml sterilne vode in dobro premešajte, centrifugirajte pri 9615g, ponovite korak 3 zgoraj. Times. Končno smo zlati prah suspendirali v 1 ml sterilne destilirane vode in shranili pri 4 ° C ali pri sobni temperaturi.

3, obdelava DNA

Vzemite 50tA suspenzijo prahu iz zlata, dodajte 5-kratno raztopino plazmidne DNA (1,0 / lg ~ 1), 50 l

0,1 mol / L spermidina (uporabljena raztopina je bila sterilno sterilizirana), stresana 3 min, pusti se pri sobni temperaturi 10 minut, centrifugira pri 9615 g 10 sekund, zavrže supernatant; dodamo 250 μl absolutnega etanola, stresamo 10 minut s centrifugiranjem pri 9615 g in zavržemo supernatant. Peleto smo resuspendirali v 60/1 1 absolutnega etanola in uporabili za 5 posnetkov (10 do 1 na strel).

4, delovanje genske pištole

Vse operacije genske pištole se izvajajo v aseptičnih pogojih, kot sledi: t

1) Dezinficirajte površino genske pištole in komoro za vzorce z 70% etanolom. Istočasno sta bila pregradna mreža in odcepljiva plošča, mikroelastični nosilec, nosilec in pritrdilno orodje 15 minut namočena s 70% etanolom in nato postavljena na čisto klop, da se posuši. Sprejemljiva membrana, fiksni pokrov in mikroelastična nosilna naprava za nosilce se lahko površinsko sterilizirajo s 70% etanolom in pihajo na suho.

2) Vstavite drsnik mikrodelcev v zadrževalni obroč in dodajte mešanico DNA in zlata prahu v sredino stekelca za mikrodelce in sušite približno 1 minuto.

3) Na držalo namestite pokvarljivo membrano in jo obrnite v smeri urinega kazalca na pospeševalnik plina.

4) Namestite prostorski obroč, blokirno mrežo, držalo zaporne mreže, nosilec delcev in pritrdilni obroč (obrnite se proti delcem obrnjenim navzdol), privijte pokrov in ga vstavite v zagrabilo.

5) Vzorec postavite v komoro za bombardiranje in zaprite vrata.

6) Odprite glavni ventil cilindra helija in zavrtite regulator regulacije helija v smeri urinega kazalca, tako da je kazalec kazalnika tlaka višji od tlaka diafragme 200Psi (= 1.379MPa).

7) Vklopite gensko pištolo in stikalo transformatorja.

8) Pritisnite gumb za sesanje. Ko je vakuum 26-28in Hg (= 88,05 .8 94,82 kPa), hitro pritisnite gumb za zadrževanje, nato pritisnite in držite gumb za zagon in ga zadržite, dokler se ne aktivira.

9) Pritisnite tipko za odzračevanje, da ponastavite vzorec po ničelni tabeli.

10) Ugasnite.

Zategnite glavno stikalo helijevega cilindra, pustite prazno pištolo, vrnite kazalec merilnika tlaka na ničlo, nato obrnite nastavitveni ventil manometra v nasprotni smeri urinega kazalca; izklopite glavno stikalo genske pištole in stikalo transformatorja.