Program priprave vzorca preostale DNA gostiteljske celice
May 21, 2021
Pustite sporočilo
Rekombinantna beljakovinska zdravila, protitelesna zdravila, cepiva in drugi proizvodi v bioloških proizvodih se izražajo in proizvajajo z neprekinjenimi celičnimi linijami. Čeprav so bili podvrženi strogim postopkom čiščenja, so v izdelkih lahko še vedno ostanki fragmentov DNA gostiteljske celice (rDNA).
Te rDNA lahko vplivajo na delovanje ključnih genov receptorja in s tem povzročijo tveganje za nalezljive ali tumogene gene.
Zato je še posebej pomembno, kako učinkovito in stabilno pridobiti sled rDNA v vzorcu. Trenutno obstajajo predvsem naslednje metode:
| Metode | Prednost | Pomanjkljivost |
| Fenol / kloroform | Visoka čistost DNA in visoka vsebnost | Zamudni, okorni koraki in strupeni |
| Padavine natrijevega jodida | enostaven za uporabo | Zamudna in nestabilna vsebnost DNA |
| Metoda stolpca | Preprosta in visoka čistost | Zamudno in težko avtomatizirano |
| Metoda magnetnih kroglic | Preprosto, visoke čistosti, je mogoče avtomatizirati | - |
![NP-2032[1]](/Content/uploads/2021213197/20210522104030d04d958e72634ed5a62eff19fd61da6f.png "NP-2032[1]") |
Ta shema obdelave temelji na principu metode magnetnih kroglic in se uporablja v sistemu za predobdelavo rDNA bioloških izdelkov, ki lahko uvede učinkovit, preprost in avtomatiziran sistem predobdelave.
Instrument za samodejno ekstrakcijo nukleinske kisline SCIENTZ je opremljen z dobro znano blagovno znamko kompleta za predhodno obdelavo vzorcev ostankov DNA gostiteljske celice (metoda z magnetnimi kroglicami), stopnja izkoristka različnih vzorcev pa je stabilna do več kot 80%, kar omogoča stabilen in učinkovit nadzor preostala vsebnost DNA gostiteljske celice v različnih bioloških proizvodih
Eksperimentalni program
Eksperimentalni materiali: instrument za avtomatsko ekstrakcijo nukleinske kisline (NP-2032), fluorescenčni instrument za kvantitativno PCR (LightCycler480), komplet za predhodno obdelavo vzorca preostale DNA gostiteljske celice (metoda z magnetnimi kroglicami), komplet za zaznavanje številke kopije genov CAR / TCR (metoda multipleks PCR - Fluorescenčna sonda) )
Eksperimentalni vzorci: vzorci retrovirusa, vzorci CAR-T celic, negativna kontrola
Poskusni koraki:
Za spremljanje.
Priprava eksperimenta-priprava vzorca-priprava ekstrakcije-začetek programa-zaznavanje preostale vsebnosti
Opombe: Instrument deluje približno 30 minut
Rezultati eksperimenta:
| Ime vzorca | MeanCp | MeanConc | Izterjani znesek | Skalar | Stopnja okrevanja |
| Negativni nadzor | 36.43 | 0.00 | - | - | - |
| Negativni nadzor + (prenosni) | 18.67 | 86.62 | 8662.15 | 9707.85 | 89% |
| Negativni nadzor | 18.72 | 53.47 | 8020.723657 | 9868.821045 | 81% |
| Vzorec virusa + | 19.15 | 63.10 | 8194.27 | 9707.85 | 84% |
| Vzorec celice | 20.21 | 32.93 | 2811.241943 | 2740.516576 | 102% |
Rezultati eksperimenta:
Avtomatizirana obdelava različnih vzorcev ima stabilne in učinkovite rezultate;
Učinkovitost avtomatizacije serijske obdelave je večja od učinkovitosti ročnega ekstrahiranja;
Izpolnjuje zahteve nove stopnje izterjave USP; je lahko dober pomočnik za predhodno obdelavo odkrivanja rDNA v bioloških proizvodih.
Prikaz izdelka:
 |