5L Neprekinjeno pretočni termostatski ultrazvočni homogenizator Sonicator

Uporaba Ultrasonic Homogenizer Sonicator v Streptomyces

V: Kakšni so pogoji za ultrasonikacijo Streptomyces?

O: Predobdelava je na splošno konfigurirana kot koncentracija suspenzije bakterij. Ultrazvočna motnja je bila izvedena z uporabo ultrazvočnega celičnega pulverizatorja. Posebni pogoji, ki so bili takrat sprejeti, so naslednji:

1. Bakterijski 24 h kulturi medij centrifugiramo pri 5 000 r / min 5 min, da zberemo celice.

2. Operite 3-krat z Bufer Na2HPO-NaH2PO pH 7,5 in nato s tem pufrom zmešajte bakterije v 1: 3 suspenzijo. Položimo v 40-mililitrsko plastično epruveto.

3. Postavite veliko plastično epruveto v ledeno kopel in uporabite ultrazvočno razbijanje (moč 200 W, 1/2 "sonda, zdrobitev 30 s, prekinjena 30 S).

4. Zdrobljeno tekočino smo centrifugirali pri 12 000 vrt./min 30 min pri visoki hitrosti, da smo zbrali celični delci in supernatant. Postopek ultrazvočne razkroja je bil v bistvu enak kot zgoraj, to pomeni, da so oprane celice lahko tudi predhodno hlajene fiziološke raztopine ali pH 8 Tris. -HCl, sperite enkrat. Poleg tega se ultrazvočni odmerek zelo razlikuje od količine vzorca in bakterij. Moč lahko doseže 400-600w, presega 5s, ustavi za 5s, ledeno kopel in dodamo PMSF s končno koncentracijo 1mM. Da bi določili ustrezno intenziteto in frekvenco ultrazvoka, je treba mikroskopsko preiskavo opazovati kadarkoli in ugotoviti, ali so celice popolnoma zlomljene. Aktinomiceti spadajo v rod Gram-pozitivnih bakterij z visokim (G + C) molskim odstotkom (mol%) na filogenetskem drevesu prokariotskih sistemov. Pri ultrazvoku E. coli se uporablja 400W ultrazvočni celulozni pulverizer in metoda super 5 stop 5 je dobra, vendar se zdi, da ne vpliva na Streptomyces. Ali bo to posledica razlike v sestavi celičnih sten, ker je E. coli gram-negativna bakterija.

Ponosna fotografija